Фенольные соединения не токсичны для человека при любом способе введения. Ранее других биологических свойств фенольных соединений было обнаружено их сосудоукрепляющее действие. Флавоноиды известны и как слабые кардиотонические средства, оказывают нормализующее влияние на лимфоток, с чем, согласуется их противоотечное действие. Одним из ценных свойств флавоноидов является их положительное влияние на функцию печени, они усиливают желчеотделение, улучшают ее детоксицирующую способность по отношению к таким веществам, как барбитураты, мышьяк. Большое значение придается противовоспалительному действию флавоноидов, с чем, связаны их противоязвенное, ранозаживляющее, жаропонижающее и вяжущее действия.
Особенности химического состава разных ботанико-географических типов прополиса зависят от своеобразия флоры в месте сбора. Каждый вид растений выделяет специфическую смесь фенольных соединений, что отражается в составе прополиса и его биологически активных свойствах [4,5].
В связи с этим цель исследования - качественный и количественный анализ фенольных соединений прополиса, собранного на территории Нижегородской области.
Материал и методы исследования
Для исследования использовали прополис, собранный на территории Нижегородской области в конце июля - начале августа 2013 года. Исследование проводили на 5 образцах.
Для качественного определения флавоноидов проводили реакции: цианидиновая проба, борно-лимонная реакция, реакция с треххлористой сурьмой, образование комплексов с солями металлов (с ацетатом свинца), взаимодействие с аммиаком и хроматографический метод анализа.
С целью подтверждения результатов качественных реакций дальнейшую идентификацию флавоноидов проводили бумажной хроматографией восходящим способом в системах растворителей: бутанол - кислота уксусная - вода (4:1:5), 60% уксусная кислота.
Для количественного определения фенольных соединений использовали фотоколориметрический метод анализа.
Результаты исследования и их обсуждение
Специфических реакций для всех групп фенольных соединений не существует. Общей реакцией на фенольные соединения является цианидиновая проба, проводимая с помощью концентрированной соляной кислоты и металлического магния. Действие водорода в момент выделения приводит к восстановлению карбонильной группы и образованию ненасыщенного пиранового цикла, который под действием соляной кислоты превращается в оксониевое соединение, имеющее окраску от желтой (флавоны) до красно-фиолетовой (флаваноны, флавонолы, флаванонолы).
Борно-лимонная реакция позволяет обнаружить 5-оксифлавоны и 5-оксифлавонолы, которые, взаимодействуя с борной кислотой в присутствии лимонной, образуют желтую окраску. 5-оксифлавоны и 5-оксифлавонолы, взаимодействуя с треххлористой сурьмой, образуют комплексные соединения, окрашенные в желтый или желто-оранжевый цвет - флавоны, в красный или красно-фиолетовый - халконы.
Характерной реакцией на флавоноиды считается их взаимодействие с аммиаком. Флавоны, флавонолы, флаваноны и флаванонолы растворяются с образованием жёлтой окраски, которая при нагревании изменяется до оранжевой или коричневой.
Присутствие фенольных гидроксилов и карбонильной группы позволяет флавоноидам образовывать комплексы различной степени устойчивости с солями металлов (Аl3+, Fe3+, Pb2+ и так далее), вступать в реакции с диазосоединениями с образованием азокрасителей. Антоцианидины дают синий аморфный осадок. Флавоны, халконы и ауроны - осадки ярко-желтого цвета.
Таким образов, на основании проведенных качественных реакций во всех образцах прополиса собранного на территории Нижегородской области, обнаружены: флавонолы, флавонол-3-гликозиды, оксафлавоны и оксифлавонолы, флавоны, халконы и ауроны (табл. 1).
Таблица 1
Результаты качественных реакций на флавоноиды прополиса
|
Качественные реакции на фенольные соединения |
Соединение, вступающее в реакцию, результат |
Цвет окрашивания |
||||
|
|
|
Образец № 1 |
Образец № 2 |
Образец № 3 |
Образец № 4 |
Образец № 5 |
|
С ацетатом свинца |
Флавоны, флаваноны, флавонолы, флаванонолы от желтого до красно-фиолетового окрашивания |
Светло-желтый |
Желтый |
Желтый |
Светло-желтый |
Желтый |
|
С аммиаком |
Флавоны, флавонолы, флаваноны, флаванонолы - желтое окрашивание |
Светло-желтый |
Желтый |
Желтый |
Светло-желтый |
Желтый |
|
Борно-лимонная реакция |
5-оксифлавоны и 5-оксифлавонолы - желтое окрашивание |
Желтый |
Желтый |
Желтый |
Желтый |
Желтый |
|
С треххлористой сурьмой |
5-оксифлавоны и 5-оксифлавонолы желтое, оранжевое окрашивание. |
Светло-желтый |
Желтый |
Желтый |
Светло-желтый |
Желтый |
|
Цианидиновая проба |
Флавоны, халконы, ауроны - осадки ярко-желтого цвета. |
Красноватая |
Красноватая |
Красноватая |
Красноватая |
Ярко-розовая |
В виду того, что фенольные соединения обладают различной растворимостью, сорбционной способностью, характерными окрасками самих веществ в видимом и фильтрованном ультрафиолетовом свете до и после проявления различными хромогенными реагентами, нами был применен и хроматографический анализ всех образцов прополиса.
В результате бумажной хроматографии в системе БУВ (4:1:5) по окраске пятен в видимом свете было обнаружено незначительное количество антоцианов. При просмотре хроматограммы в УФ-спектре были обнаружены флавоны, флаваноны, флавонолы - в виде желтых пятен. По характеру свечения хроматограммы в УФ-свете после проявления 5%-ным спиртовым раствором хлорида алюминия и последующего прогревания хроматограммы при 105°С в течение 2-3 мин, наблюдали пятна флавоноидов с интенсивной желто-зеленой флуоресценцией.
Таким образом, присутствие флавонов, флаванонов, флавонолов подтверждено нами и хроматографически.
Количественное определение флавоноидов проводили фотоколориментрическим методом.
Эксперимент выявил следующее содержание фенольных соединений в исследуемых образцах прополиса (табл. 2).
Таблица 2
Содержание фенольных соединений в прополисе
|
Содержание фенольных соединений, % |
||||
|
Образец № 1 |
Образец № 2 |
Образец № 3 |
Образец № 4 |
Образец № 5 |
|
5,5 |
4,9 |
4,8 |
5,1 |
4,4 |
Подобное содержание фенольных соединений делает прополис одним из самых богатых источников фенольных соединений и позволяет использовать его в медицинских и фармакологических целях.
Заключение
В ходе исследования прополиса, собранного в Нижегородской области были обнаружены соединения флавоноидной природы, которые можно отнести к группам: флавоны, флаваноны, флавонолы и флаванонолы. Хроматографический анализ извлечений также показал присутствие основных групп полифенолов: флавонолы, флавононы и антоцианы. Количественное содержание флавоноидов составило 5,5%, 4,9%, 4,8%, 5,1% и 4,4% соответственно, что является приемлемым показателем для использования прополиса в медицинских и фармакологических целях.
Рецензенты:
Тяпугин С.Е., д.с.-х.н., профессор кафедры физиологии и биохимии животных ФГБОУ ВПО «Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия», г. Нижний Новгород;
Великанов В.И., д.б.н., профессор кафедры анатомии, хирургии и внутренних незаразных болезней ФГБОУ ВПО «Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия», г. Нижний Новгород.