Scientific journal
Modern problems of science and education
ISSN 2070-7428
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,791

ANALYSIS OF THE CONTRIBUTIONOF THE FOLATEGENE POLYMORPHISM EXCHANGE IN THE GENETIC PREDISPOSITION TO THE DEVELOPMENT OF PREECLAMPSIA

Tverskaya A.V. 1
1 FGAOUVPO "Belgorod State University"
В статье приведены результаты исследования ассоциаций молекулярно-генетических маркеров генов фолатного цикла с развитием преэклампсии у беременных русской национальности, являющихся уроженками Центрального Черноземного региона России. Проведен комплексный анализ частот аллелей и генотипов у беременных с преэклампсией и контрольной группы (беременных с нормально протекающей беременностью). В группу беременных с преэклампсией вошли 315 пациенток, контрольную группу составили 179 беременных без преэклампсии. Установлено, что наибольшие различия частот генетических полиморфизмов генов фолатного обмена у беременных с преэклампсией и контрольной группы выявлены по +1298АС MTHFR (35,74% и 41,52%, соответственно), +1298СС MTHFR (20,96% и 13,45%), MTR+2756GG (5,35% и 2,41%), +1420ТТ SHMT1 (14,14% и 8,72%), IVS6-68CT TYMS (8,36% и 4,24%).
The results of the study associations molecular genetic markers folate cycle genes with the development of preeclampsia in pregnant women with Russian nationality, who are natives of the Central Black Earth region of Russia. The complex analysis of allele and genotype frequencies in pregnant women with preeclampsia and control group (pregnant women with normal pregnancy). In the group of pregnant women with preeclampsia included 315 patients and the control group consisted of 179 pregnant women without preeclampsia. It was established that the greatest differences of frequencies of genetic polymorphisms of folate metabolism in pregnant women with preeclampsia and control groups identified by +1298ASMTHFR (35,74% and 41,52% respectively), +1298SSMTHFR (20,96% and 13,45% ), MTR + 2756GG (5,35% and 2.41%) +1420TTSHMT1 (14,14% and 8,72%), IVS6-68CT TYMS (8,36% and 4.24%).
preeclampsia
pregnancy
folate metabolism genes
Преэклампсия (ПЭ) - это патологическое состояние, которое осложняет течение беременности и характеризуется нарушением нервной, сосудистой, иммунной, эндокринной систем и системы гемостаза, а также, изменениями в функциях жизненно-важных органов (почек, печени, головного мозга, различными метаболическими изменениями адаптационных систем организма [1].Существует более 30 аргументированных этиопатогенетических суждений о возникновении преэклампсии, однако, к сожалению, ни одно из них не объясняет однозначно и в полной мере многообразие происходящих при данном осложнении беременности морфофункциональных изменений и клинических манифестаций [4, 5].Важным маркером развития осложнений беременности и её неблагоприятного исхода служит гомоцистеин. Гипергомоцистеинемия во время беременности приводит к таким осложнениям, как: преэклампсия, привычная потеря плода, плацентарная недостаточность, задержка развития плода [2].Исследования, посвящённые этиологии и патогенезу преэклампсии, свидетельствуют, что существует прямая зависимость риска данного осложнения беременности от низкого содержания фолатов и гипергомоцистеинемии. «Семейная» преэклампсия или преэклампсия в анамнезе сопряжена с дефицитом фолатов и высоким уровнем гомоцистеина, участвующих в развитии преэклампсии [3].

Цель исследования: изучить клиническое значение полиморфных генов-кандидатов фолатного обмена при преэклампсии.

Материалы и методы

Проведено изучение 501 женщины: 315 беременных с диагнозом преэклампсия и 179 женщин с нормальным течением беременности (контрольная группа). В настоящее исследование вошли лица русской национальности, не имеющие между собой родства, являющиеся уроженками Центрально-Черноземного региона России. Клинико-лабораторное обследование женщин основной и контрольной группы проводилось на сроке родоразрешения на базе Перинатального центра Белгородской областной клинической больницы им. Святителя Иоасафа.

В основную группу включены беременные с диагнозом преэклампсия. Диагноз преэклампсии ставился на основании генерализованных отеков, артериальной гипертензии и протеинурии. Средний возраст женщин с ПЭ составил 27,19±6,4 лет (варьировал от 18 до 44 лет).

В контрольную группу вошли беременные без диагноза преэклампсия в возрасте от 19 до 41 года (средний возраст женщин составил - 26,71±6,36 лет) (р>0,05). Таким образом, контрольная группа беременных не отличалась от основной группы по полу, месту рождения, возрасту и национальности.

Клинико-лабораторное обследование проводилось на базе перинатального центра Белгородской областной клинической больницы им. Св. Иоасафа. Материалом для исследования послужила венозная кровь, полученная в объеме 8-9 мл из локтевой вены пробанда. Забор венозной крови производили в пробирки с консервантом, содержащим 0,5М раствор ЭДТА (рН=8.0).Выделение геномной ДНК из периферической крови проведено методом фенольно-хлороформной экстракции. Анализ локусов MTHFR +677C>T, MTHFR +1298A,TYMS-1053C>T, TYMS IVS6-68C>T, TYMS -1122А>G, SHMT1 +1420C>T, MTR+1166А>G, MTRR +66А>G генов фолатного обмена осуществлялся с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием стандартных олигонуклеотидных праймеров и зондов с последующим анализом полиморфизма методом детекции TaqMan зондов. Расчет фенотипических и генных частот проводили стандартными методами.Выбор данных генетических полиморфизмов обусловлен их возможной вовлеченностью в патогенез преэклампсии [6].

Результаты исследования и их обсуждение

Популяционно - генетический анализ распределения изучаемых полиморфных маркеров ферментов фолатного цикла проводили на выборке женщин с диагнозом ПЭ и беременных без ПЭ (контрольной группы). Результаты генотипирования женщин с диагнозом ПЭ и контрольной группыпо локусам MTHFR +677C>T, MTHFR +1298A,TYMS -1053C>T, TYMS IVS6-68C>T, TYMS -1122А>G, SHMT1 +1420C>T, MTR+1166А>G, MTRR +66А>G, представлены в таблицах 1 и 2.

Таблица 1

Распределение генотипов, наблюдаемой и ожидаемой гетерозиготности, индекса фиксации полиморфных маркеров ферментов фолатного цикла у беременных с преэклампсией и в контрольной группе

Локусы

показатели

Беременные с преэклампсией

(n=322)

Беременные без преэклампсии

(n=179)

 

MTHFR +677C>T

(rs 1801133)

ΣN

302

177

 

N0 (NE)

СС

141 (144,64)

82 (84,78)

СТ

136 (128,72)

81 (75,44)

ТТ

25 (28,64)

14 (16,78)

χ2(HWE) (p)

0,97 (>0,05)

0,96 (>0,05)

H0 (HE)

0,45 (0,43)

0,46 (0,43)

D (t)

+0,06 (0,75)

+0,07 (0,75)

 

TYMS -1053C>T

(rs 699517)

ΣN

305

173

 

N0 (NE)

CC

160 (157,25)

89 (91,77)

СТ

118 (123,50)

74 (68,46)

TT

27 (24,25)

10 (12,77)

χ2(HWE) (p)

0,61 (>0,05)

1,13 (>0,05)

H0 (HE)

0,39 (0,40)

0,43 (0,40)

D (t)

-0,04 (0,56)

+0,08 (0,74)

 

SHMT1+1420C>T

(rs 1979277)

ΣN

297

172

 

N0 (NE)

CC

136 (128,69)

86 (85,93)

CT

119 (133,62)

71 (71,35)

TT

42 (34,69)

15 (14,83)

χ2(HWE) (p)

3,56 (>0,05)

0,004 (>0,05)

H0 (HE)

0,40 (0,45)

0,41 (0,41)

D (t)

-0,11 (1,59)

-0,005 (0,05)

 

MTR +2756A>G

(rs 1805087)

ΣN

299

166

 

N0 (NE)

AA

183 (181,57)

99 (102,59)

АG

100 (102,86)

63 (55,82)

GG

16 (14,57)

4 (7,59)

χ2(HWE) (p)

0,23 (>0,05)

2,75 (>0,05)

H0 (HE)

0,33 (0,34)

0,38 (0,34)

 

MTRR +66A>G

(rs 1801394)

ΣN

302

171

 

N0 (NE)

GG

106 (101,99)

55 (53,89)

AG

139 (147,02)

82 (84,21)

AA

57 (52,99)

34 (32,89)

χ2(HWE) (p)

0,90 (>0,05)

0,12(>0,05)

H0 (HE)

0,46 (0,49)

0,48 (0,49)

D (t)

-0,05 (0,90)

-0,03 (0,33)

 

TYMS IVS6-68C>T

(rs 1059394)

ΣN

287

165

 

N0 (NE)

CC

158 (154,36)

89 (92,44)

CT

105 (112,22)

69 (62,14)

TT

24 (20,39)

7 (10,44)

χ2(HWE) (p)

1,19 (>0,05)

2,02 (>0,05)

H0 (HE)

0,37 (0,39)

0,42 (0,38)

D (t)

-0,06 (0,76)

+0,11 (0,92)

 

TYMS -1122A>G

(rs 2790)

ΣN

297

172

 

N0 (NE)

AA

202 (201,28)

121 (121,40)

АG

85 (86,44)

47 (46,21)

GG

10 (9,28)

4 (4,40)

χ2(HWE) (p)

0,08 (>0,05)

0,05(>0,05)

H0 (HE)

0,29(0,29)

0,27 (0,27)

D (t)

-0,02 (0,15)

+0,02 (0,11)

 

MTHFR +1298A>C

(rs 1801131)

ΣN

291

171

N0 (NE)

AA

126 (108,88)

77 (74,01)

AC

104 (138,24)

71 (76,97)

CC

61 (43,88)

23 (20,01)

χ2(HWE) (p)

17,85 (<0,001)

1,03 (>0,05)

H0 (HE)

0,36 (0,48)

0,42 (0,45)

D (t)

-0,25 (3,99)

-0,08 (0,85)

примечание: σn - объем выборки; n0 - наблюдаемое распределение генотипов; ne - ожидаемое распределение генотипов; χ2(hwe) показатель соответствия наблюдаемого распределения ожидаемому, исходя из равновесия харди-вайнберга; p - достигнутый уровень значимости для χ2(hwe); h0 - наблюдаемая гетерозиготность; he - ожидаемая гетерозиготность; d - индекс фиксации райта t; - критерий стьюдента, характеризующий индекс фиксации;

Таблица 2

Сравнительный анализ частот аллелей и генотипов полиморфных маркеров ферментов фолатного цикла у беременных с преэклампсией и в контрольной группе женщин

Гены

Аллели, генотипы

Беременные с преэклампсией

n=322

Беременные без преэклампсии

n=179

χ2, p

 

OR

(95%CI)

 

n

%

n

%

MTHFR +1298A>C

(rs 1801131)

А

356

61,17

225

65,79

χ2=1,79

p=0,18

0,82

(0,61-1,09)

С

226

38,83

117

34,21

1,22

(0,92-1,63)

АА

126

43,30

77

45,03

χ2=0,07

p=0,79

0,93

(0,63-1,39)

 

АС

104

35,74

71

41,52

χ2=1,29 p=0,26

0,78

(0,52-1,17)

СС

61

20,96

23

13,45

χ2=3,60 p=0,06

1,71

(0,98-2,98)

MTR +2756A>G

(rs 1805087)

A

466

77,93

261

78,61

χ2=0,03

p=0,87

0,96

(0,68-1,35)

G

132

22,07

71

21,39

1,04

(0,74-1,46)

АА

183

61,20

99

59,64

χ2=0,05 p=0,82

1,07

(0,71-1,60)

AG

100

33,44

63

37,95

χ2=0,77

p=0,38

0,82

(0,54-1,24)

GG

16

5,35

4

2,41

χ2=1,59

p=0,21

2,29

(0,70-8,25)

 

SHMT1+1420C>T

(rs 1979277)

C

391

65,82

243

70,64

χ2=2,09

p=0,15

0,80

(0,59-1,08)

T

203

34,18

101

29,36

1,25

(0,93-1,68)

CC

136

45,79

86

50,00

χ2=0,61 p=0,43

0,85

(0,57-1,25)

CT

119

40,07

71

41,28

χ2=0,03 p=0,87

0,95

(0,64-1,42)

TT

42

14,14

15

8,72

χ2=2,51 p=0,11

1,72

(0,89-3,37)

MTRR +66A>G

(rs 1801394)

G

351

58,11

192

56,14

χ2=0,27

p=0,60

1,08

(0,82-1,43)

A

253

41,89

150

43,86

0,27

(0,70-1,22)

GG

106

35,10

55

32,16

χ2=0,30 p=0,58

1,14

(0,75-1,73)

AG

139

46,03

82

47,95

χ2=0,10 p=0,76

0,93

(0,63-1,37)

AA

57

18,87

34

19,88

χ2=0,02

p=0,88

0,94

(0,57-1,55)

 

 

TYMS -1053C>T

(rs 699517)

 

C

n

%

n

%

438

71,80

252

72,83

 

TYMS -1053C>T

(rs 699517)

 

TYMS IVS6-68C>T

(rs 1059394)

 

-1122

A/G TYMS

Т

172

28,20

94

27,17

 

χ2=0,07 p=0,79

 

 

0,95

(0,70-1,29)

CC

160

52,46

89

51,44

1,05

(0,78-1,43)

CT

118

38,69

74

42,77

χ2=0,01

p=0,91

1,04

(0,71-1,54)

 

TT

27

8,85

10

5,78

χ2=0,61 p=0,44

0,84

(0,57-1,26)

 

C

423

73,69

247

74,85

χ2=1,06 p=0,30

1,58

(0,71-3,60)

 

 

TYMS IVS6-68C>T

(rs 1059394)

 

-1122

A/G TYMS

 

TYMS -1122A>G

(rs 2790)

 

+677

C/T

MTHFR

T

151

26,31

83

25,15

 

χ2=0,09

p=0,76

 

0,94

(0,68-1,30)

CC

158

55,05

89

53,94

1,06

(0,77-1,47)

CT

105

36,59

69

41,82

χ2=0,09

p=0,76

χ2=0,02 p=0,90

1,05

(0,70-1,57)

 

TT

24

8,36

7

4,24

χ2=1,00 p=0,32

0,80

(0,53-1,21)

 

A

489

82,32

289

84,01

χ2=8,73 p=0,004

3,65

(1,47-9,48)

 

 

TYMS -1122A>G

(rs 2790)

 

+677

C/T

MTHFR

 

MTHFR +677C>T

(rs 1801133)

G

105

17,68

55

15,99

 

χ2=0,33 p=0,57

 

0,89

(0,61-1,29)

AA

202

68,01

121

70,35

1,13

(0,78-1,64)

AG

85

28,62

47

27,32

χ2=0,18 p=0,67

0,90

(0,58-1,38)

 

GG

10

3,37

4

2,32

χ2=0,04

p=0,85

1,07

(0,69-1,66)

 

C

418

69,21

245

69,21

χ2=0,13 p=0,72

1,46

(0,41-5,63)

 

 

MTHFR +677C>T

(rs 1801133)

T

186

30,79

109

30,79

 

χ2=0,01 p=1,00

 

1,00

(0,75-1,34)

CC

141

46,69

82

46,33

1,00

(0,75-1,34)

 

CT

136

45,03

81

45,76

χ2=0,015

p=1,00

1,02

(0,69-1,50)

 

 

TT

25

8,28

14

7,91

χ2=0,004 p=1,95

0,97

(0,66-1,43)

Исследование распределения генотипов изучаемых полиморфных маркеров ферментов фолатного цикла показало, что для большинства рассмотренных маркеров у беременных с ПЭ и беременных женщин без ПЭ, эмпирическое распределение генотипов соответствует теоретически ожидаемому при равновесии HWE (p>0,05). По локусу MTHFR +1298A>Су женщин с ПЭ выявлено отклонение от равновесия Харди-Вайнберга за счет снижения фактической гетерозиготности по сравнению с теоретической (Но=0,36, Не=0,48,

D=-0,25, χ2=17,85, p<0,001).Уровень аллельного разнообразия по изученным локусам варьировал от Но=0,27 (для локуса TYMS -1122А>G) до Но=0,48 (для локуса MTRR +66А>G) в группе беременных без ПЭ и от Но=0,29 (TYMS -1122А>G) до Но=0,46 (для локуса MTRR +66А>G)среди беременных с ПЭ.

При сравнительном анализе распределения частот аллелей и генотипов полиморфных маркеров ферментов фолатного цикла в группах беременных с ПЭ и здоровых беременных установлена более высокая частота (практически в 2 раза) генетического варианта IVS6-68 ТT TYMS (8,36%) у женщин с ПЭ по сравнению с беременными контрольной группы (4,24%; χ2=8,73; р=0,004; OR=3,65; 95%Cl 1,47-9,48).

По другим исследуемым генетическим полиморфизмам достоверных различий в концентрациях аллелей и генотипов не обнаружено (p>0,05).

Выводы

Таким образом, полученные результаты свидетельствует о том, что наибольшие различия частот генетических полиморфизмов генов фолатного обмена у беременных с преэклампсией и контрольной группы выявлены по +1298АС MTHFR (35,74% и 41,52%, соответственно), +1298СС MTHFR (20,96% и 13,45%), MTR+2756GG (5,35% и 2,41%), +1420ТТ SHMT1 (14,14% и 8,72%), IVS6-68CT TYMS (8,36% и 4,24%).

Рецензенты:

Чурносов М.И., д.м.н., профессор, заведующий кафедрой медико-биологических дисциплин, медицинский факультет фгаоу впо «Белгородский государственный национальный исследовательский университет» (НИУ «БелГУ»), г. Белгород;

Сорокина И.Н., д.м.н., доцент, профессор кафедры медико-биологических дисциплин, медицинский факультет фгаоу впо «Белгородский государственный национальный исследовательский университет» (НИУ «БелГУ»), г. Белгород.